Перекрестная активность специфических антител к антигенам возбудителей пастереллеза у телят

Респираторные заболевания крупного рогатого скота наносят значительный экономический ущерб отрасли животноводства по всему миру. Наиболее часто регистрируемыми возбудителями бронхопневмонии у крупного рогатого скота являются микроорганизмы семейства Pasteurellaceae – Pasteurella multocida (P. multocida) и Mannheimia haemolytica (M. haemolytica) . Микроорганизмы являются условно-патогенными и обитают на слизистых оболочках верхних дыхательных путей и заглоточных лимфоузлах, не вызывая заболевания.

В настоящее время во многих животноводческих хозяйствах Республики Беларусь регистрируют заболевания с поражением респираторного тракта, обусловленные M. haemolytica или ассоциацией M. haemolytica и P. multocida.

К факторам вирулентности M. haemolytica относят лейкотоксин, липополисахарид, капсульные полисахариды и различные протеины наружной клеточной мембраны. Лейкотоксин M. haemolytica является одним из основных факторов вирулентности микроорганизма . По общепринятой классификации лейкотоксин относится к группе высокомолекулярных кальций-зависимых токсинов, продуцируемых грамотрицательными бактериями, которые имеют структурную, антигенную и генетическую гомологию с гемолизинами E. coli. Лейкотоксин имеет β2 рецепторы адгезии только на лейкоцитах жвачных видов животных. Из литературных данных известно, что высокий уровень антител к лейкотоксину коррелирует с устойчивостью животных к заболеванию.

Профилактика пастереллеза у крупного рогатого скота осуществляется с применением различных инактивированных моно- и поливалентных вакцин. (Вакцина инактивированная эмульгированная против пастереллеза КРС) С целью пассивной профилактики возможно также применение у телят сыворотки поливалентной против пастереллеза (Сыворотка против пастереллеза крупного рогатого скота, овец и свиней)

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

В работе использовали эпизоотические штаммы М. haemolyticа (КМИЭВ – В158) и P. multocida (КМИЭВ-В166), которые депонированы в коллекции микроорганизмов РУП «Институт экспериментальной ветеринарии им. С.Н. Вышелесского».

Отбирали кровь у телят из неблагополучного по пастереллезу хозяйства. Для изучения перекрестной активности специфических антител сыворотку крови абсорбировали антигенами P. multocida и М. haemolyticа при 20-220С в течение 2 часов.

Всего испытано 4 образца, для этого пул сыворотки крови от трех, больных бронхопневмонией телят, разделили на 4 части:

№1 – сыворотка крови + P. multocida,

№2 – сыворотка крови + М. haemolyticа,

№3- сыворотка крови + P. multocida и М. haemolyticа,

№4 – интактная сыворотка крови с соответствующим разведением по объему ЗФР.

Для специфической абсорбции бактериальные штаммы добавляли в сыворотку крови телят в конечной концентрации 1,5х109 м.т./мл сыворотки крови. После завершения абсорбции образцы центрифугировали при 4000g в течение 10 минут. Надосадочную жидкость отбирали и подвергали стерилизующей фильтрации с помощью фильтров 0,22µM (Millipore).

Результат специфической абсорбции учитывали в тест-системе ИФА (тест-ситема ИФА для выявления уровня антител к антигенам P.multocida, М. haemolytica и лейкотоксину М. haemolytica в крови крупного рогатого скота, производства РУП «Институт экспериментальной ветеринарии им. С.Н. Вышелесского»). При постановке ИФА каждый экспериментальный образец испытывали не менее чем в 4-х повторах. Учет результатов ИФА проводили, измеряя оптическую плотность на спектрофотометре при длине волны 450нм. Реакцию учитывали, если значение оптической плотности между значениями положительного и отрицательного контролей набора К+/К- составляло ≥2,0.

Статистическую обработку экспериментальных данных проводили с помощью критерия t-Стьюдента для независимых выборок.

При изучении влияния абсорбции бактериальными антигенами на уровень специфических антител в крови телят были получены следующие результаты (таблица).

Абсорбция сыворотки телят антигеном P. multocida приводила к достоверному снижению уровня гомологичных антител при этом уровень гетерологичных антител к M. haemolytica достоверно не изменялся. Антитела к лейкотоксину M. haemolytica оставались на уровне контрольного значения (№4).

Абсорбция сыворотки бактериальным антигеном M. haemolytica приводила к достоверному снижению уровня гомологичных антител и гетерологичных антител к антигену P. multocida. Следует отметить, что антиген M. haemolytica способствовал также достоверному снижению в сыворотке крови уровня антител к лейкотоксину M. haemolytica.

ВЫВОДЫ

Результаты экспериментальной работы свидетельствуют о наличии общих антигенных структур у бактерий P. multocida и haemolytica семейства Pasteurellaceae. При этом антиген P. multocida не абсорбировал антитела к фактору вирулентности M. haemolytica – лейкотоксину. Таким образом, перекрестная межвидовая активность специфических антител распространяется только на клеточные антигены бактерий, но не на факторы вирулентности, индуцируемые ими.
Обоснована необходимость комплексного подхода при разработке препаратов специфической профилактики против пастереллеза и включения в их состав антигенов факторов вирулентности микроорганизмов, в частности лейкотоксина M. haemolytica.